產(chǎn)品名稱：小鼠黑色素瘤細(xì)胞

英文名稱：B16

培養(yǎng)基：RPMI-1640*培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%FBS

形態(tài)：貼壁，成纖維細(xì)胞樣，短梭型，換用DMEM-H培養(yǎng)細(xì)胞可以產(chǎn)黑色素，驗(yàn)證過程中細(xì)胞有黑色素的產(chǎn)生，但是細(xì)胞分泌物也會(huì)增加，細(xì)胞狀態(tài)會(huì)變差

生長(zhǎng)條件：培養(yǎng)溫度37℃；氣體環(huán)境5%CO2+95%空氣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

儲(chǔ)存方式：液氮

應(yīng)用領(lǐng)域：該細(xì)胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以產(chǎn)生黑色素，同基因小鼠體內(nèi)移植可成瘤

傳代方法：

復(fù)蘇步驟：①凍存管從液氮或-80℃中取出放入PE手套中，迅速?zèng)]入37℃水浴鍋，搖晃凍存管加速溶解，以1分鐘內(nèi)全部溶解為宜；②在超凈臺(tái)中將溶解好的細(xì)胞液加入到裝有9ml犕耆嘌睦胄墓苣冢?000-1200rpm/min離心5分鐘，棄去上清液，用1-2mL*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。③然后將細(xì)胞懸液加入到含有5-6mL*培養(yǎng)基的T25瓶中，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 細(xì)胞傳代：①將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入1-2mL胰霉（0.25%Trypsin 0.02%EDTA）；②鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（可用吸管吸起些許胰霉輕輕吹打細(xì)胞層某處，肉眼可見細(xì)胞層脫落，即消化完成，否則繼續(xù)消化），直接吸掉胰霉，加入5-6毫升*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。③將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。④注意培養(yǎng)基pH值變化和細(xì)胞密度，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，重復(fù)傳代操作或者凍存。

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