信帆生物提供高靈敏度,特異性好,即用型的ELISA試劑盒,長期與全國各大高校合作,引用文獻上千篇。
ELISA試劑盒包含預包被酶標板、檢測抗體、鏈酶親和素標記的HRP、標準品、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測緩沖液等10個成分。
ELISA在操作前試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質控品和樣品,建議做復孔。ELISA緩沖液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液,至50ml離心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸餾水至1000毫升。
加樣注意事項:
取出已恢復至室溫的酶標板,加入300微升洗液,以洗去包被抗體保護劑,使包被抗體處于最佳活性狀態,靜置浸泡30秒。洗板結束后,立即使用酶標板,不要讓酶標板干燥。
排版布局H1、H2孔為空白孔,A1、A1至G1、G2為標準曲線的S1至S7孔,每孔加入50微升的Assay Buffer,根據排版,每孔加入50微升標準品和樣本,加樣時,垂直懸空加入液體,加完后槍頭輕輕碰液面(建議標準品,樣本都做復孔),最后每孔加入50微升檢測抗體,加完后用封板膜小心封好酶標板,為讓抗原抗體充分接觸。
洗滌注意事項:
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA 操作中,洗滌是主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。
計算方法:
檢測完成后,以標準品濃度做為縱坐標,對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用計算機軟件,采用四參數Logistic曲線擬合(4-pl),創建標準曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋,通過上述方法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數,才是樣品的終濃度。
抄筆記總結:
1. 從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
信帆生物是專業的ELISA試劑盒供應商,提供大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒等等,產品質量穩定,庫存充足,價格實惠,深受廣大科研用戶青睞。
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