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TEV蛋白酶的應用
更新時間:2024-12-18   點擊次數:213次

TEV蛋白酶的應用


rTEV 蛋白酶(重組型)是經過基因工程改造后的重組蛋白酶,該酶特異性識Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly 七氨基酸序列。rTEV 蛋白酶與腸激酶 U(EK)、Thrombin、FactorXa、SUMO 等蛋白酶相比,具有高活性、高特異性的雙重特點,rTEV 蛋白酶因具高剪切活性和特異性,已成為融合蛋白表達后去除融合 tag 的首選蛋白酶。該酶經 6×His 標簽純化而得(含組胺酸標簽),純度達99%, 剪切反應完畢后可通過His標簽純化樹脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)去除,以達到純化目的蛋白的目的。

 

影響天然TEV酶活性的常見因素:1PMSFAEBSF1 mM),TLCK1 mM),Bestatin1 mg/ml)、Pestatin A1 mM),EDTA1 mM)以及E-643 mg/ml),以上這些蛋白酶抑制劑對rTEV的活性沒有影響;2Zn離子(>5 mM)對rTEV活性有抑制;3)與半胱氨酸反應的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。

 

表達方式: A DNA sequence encoding the TEV Protease NP_062908 Gly 2038- Gly 2280 was fused with polyhistidine tag at the N-terminus, with a Ser 2256 Asn mutation

種屬:Human

表達宿主: E.Coli

QC Testing

純度:> 95%, as determined by SDS-PAGE

內毒素:< 1.0 EU per 1μg cytokine as determined by the LAL method.

穩定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt -70°C

預測N: Met 1

分子量:The recombinant human TEV protease consists of 251 amino acids and has a predicted molecular mass of 28.6 kDa. As estimated in SDS-PAGE under reducing conditions.

緩沖液: Supplied as a 0.2μm filtered solution of 50mM Tris, 10%Sucrose,5mM DTT pH8.0

SDS-PAGE:

Usage Guide

儲存方法:Store it under sterile conditions at -70. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage and usage. Avoid repeated freeze-thaw cycles.

 

特性:

特異性:TEV蛋白酶具有高度特異性,能夠選擇性地剪切含有特定識別序列(如Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-GlnGly/Ser7)的多肽鏈,而不會引起非特異性剪切或其他與剪切位點無關的酶活性。

催化效率:TEV蛋白酶的催化效率很高,能夠在短時間內實現蛋白酶解反應。

穩定性:TEV蛋白酶具有較好的耐熱性和耐酸堿性,可以在不同的反應條件下工作。

活性:TEV蛋白酶在低溫下也具有活性,并且其突變體具有自溶耐受性。

 

應用:

重組蛋白表達系統:TEV蛋白酶常用于從融合蛋白中去除親和純化標簽,如GSTHis等,從而得到純化的目標蛋白。

結構生物學研究:在結構生物學研究中,TEV蛋白酶可用于切割目標蛋白分子中特定的位點,以便于分子結構的研究。

蛋白酶解研究:TEV蛋白酶還可用于研究蛋白質酶解過程中的底物選擇性、酶解位點、速率等相關問題。

 


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