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羥檢測試劑盒(分光光度法)說明書

點擊次數:1304 發布時間:2018/6/14
提 供 商: 南京信帆生物技術有限公司 資料大小:
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羥檢測試劑盒(分光光度法)說明書
規格: 50T/48S
產品簡介:
HYP 是機體膠原蛋白主要成分之一,膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等,因此HYP 含量是反映
膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標。
樣品經水解產生游離的HYP,進一補被氯胺T 氧化,氧化產物與對二甲氨基苯甲醛反應,產生紅色化合物,
在560nm 處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm 吸光值,可計算HYP 含量。
產品內容:
組織提取液:6mol/L 鹽酸,自備。濃鹽酸:H2O(V/V)= 1:1,室溫保存;
細胞提取液:液體100mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑一:液體10mL×1 瓶,4 ℃避光保存;
試劑二:液體10mL×1 瓶,4 ℃避光保存。
操作步驟:
一、羥提取:
1. 組織:取約0.5g 樣品于玻璃管,加入5mL 的組提取液,置于110℃烘箱,水解6 至12 小時,16000rpm,25℃,
離心20min,用提取液定容至5mL,取上清待測。
2. 細胞:取約500 萬個細胞,加入2mL 的細胞提取液,于高壓消毒器中15 磅保持30min,自然降壓后待測。
二、測定操作:
對照管測定管
樣本(mL) 0.2
試劑一(mL) 0.2 0.2
混勻,室溫靜置20min
試劑二(mL) 0.2 0.2
H2O(mL) 0.6 0.4
混勻,60℃,20min,取出后室溫靜置15 min,測定A560。(A560=A 測定-A 對照)
羥含量計算:
標準曲線:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按組織計算
HYP 含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷64.875×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)
=0.385×(A560-0.0251)÷W
(3)按細胞計算:
HYP 含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷64.875×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數量(萬個)
=0.154×(A560-0.0251)÷細胞數量(萬個)
V 反總:反應體系總體積,1mL; V 樣:反應中樣本體積,0.2mL;V 樣總:加入提取液體積,mL; W:
樣本質量,g。
注意事項:
1、OD 值大于0.8,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2、試劑有一定的毒性,請操作時做好防護措施,防止吸入或與皮膚接觸。

 
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