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人外周血白細胞分離液試劑盒太好用了!
更新時間:2018-07-20   點擊次數:1352次

人外周血白細胞分離液試劑盒太好用了!
 

規格:200 mL/kit


保存:本產品對光敏感,應該室溫避光儲存,保質期 2 年。無菌開封后,保存于室溫。


試劑盒組成:


各種動物外周血白細胞分離液 200mL

細胞洗滌液 200mL

紅細胞裂解液 100mL


操作步驟:


1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液。


2. 在離心管中加入適量分離液(血液體積小于5mL時,加入5mL分離液;大于等于5mL,加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二,否則會影響分離效果),將血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液上,因為兩者的密度差異,將形成明顯的分層界面。如果樣品較多,加樣的時間較長,在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正常現象。)


3. 室溫,水平轉子500~1000g,離心20~30min(血液的體積越大所需的離心力越大,離心時間越長,zuijia的分離條件需摸索,離心轉速zui大不超過1200g)。


4. 離心后將出現明顯的分層:zui上層是稀釋的血漿層;血漿與分離液之間是淋巴細胞層;分離液中為粒細胞層(個體差異或者是分離條件不同,粒細胞層可能分離不明顯);zui下層為紅細胞層。

 

人外周血白細胞分離液試劑盒太好用了!


5. 小心的吸取淋巴細胞層及分離液層細胞到15mL潔凈的離心管中,10mL PBS或細胞洗滌液洗滌細胞。250g,離心10min(如有紅細胞混雜則加入適量紅細胞裂解液)


6. 棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心10min。


7. 重復步驟6


8. 棄上清,細胞重懸備用。


注意事項:


A. 開封前顛倒混勻,本分離液為無菌產品,為延長分離液保存時間,請在無菌條件下啟封,避免微生物污染。。


B. 分離液使用時應始終保持室溫(18℃~25℃),如室內溫度較低,可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。


C. 血液樣本為新鮮抗凝血(采血2 h以內),為保持淋巴細胞的活性,應避免冷凍和冷藏。


D. 血液樣本不需稀釋,直接進行分離即可。


E. 稀釋血液或洗滌細胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液,其成分會導致血細胞凝集,大大降低細胞得率及純度。
 

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